非小细胞肺癌组织中ET?1、TSP?1的表达与血管生成的相关性(一)

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作者：王春玲 阎红娥 刘? 李爽

【摘要】 　　目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中内皮素? 1（ET?1）、血小板反应蛋白? 1( TSP?1)的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法 用免疫组化法检测45 例NSCLC 组织和18 例正常肺组织中ET?1、TSP?1的表达及微血管密度（MVD）的计数。结果 NSCLC 组织中ET?1的阳性表达率（42.22％）显著高于对照组，ET?1的表达与NSCLC的组织学分级、淋巴结转移有密切关系，ET?1阳性组MVD明显高于ET?1阴性组。TSP?1在NSCLC中的阳性表达率（37.78％）低于对照组，TSP?1的表达与淋巴结转移有关，TSP?1阳性组MVD低于TSP?1阴性组。MVD与ET?1表达水平呈正相关，与TSP?1表达水平呈负相关。结论 在NSCLC 组织中ET?1作为一种促血管生成因子，TSP?1作为一种抑制血管生成因子，两者参与肺癌的血管形成，且有协同作用。

【关键词】 非小细胞肺癌；内皮素?1；血小板反应蛋白?1；血管形成

　　内皮素?1（ET?1）作为促血管生成因子之一〔1〕，而血小板反应蛋白?1 (TSP?1) 作为血管生成抑制因子之一〔2〕，两者在肿瘤血管形成中的作用日益引起广泛的重视。本实验采用免疫组化法检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织中ET?1、TSP?1的表达及其与微血管密度(MVD)的关系，并探讨它们在NSCLC中与血管生成、肿瘤侵袭转移的关系。

　　1 材料与方法

　　1.1 组织标本

　　收集我院2006～2009年手术切除并经病理确诊的NSCLC病例45例，年龄32～75〔平均（61.2±13.9）〕岁,其中，男27例，女18例。所有患者术前均未接受化疗、放疗及其他抗癌治疗，其中，鳞癌31例，腺癌14例；高分化19例，中分化12例，低分化14例；有肺门或纵隔淋巴结转移的16例，无淋巴结转移的29例。同时选取18例同期手术的正常肺组织作对照。

　　1.2 主要试剂

　　鼠抗人TSP?1单克隆抗体购于美国Neomarker公司；兔抗人内皮素多克隆抗体、兔抗人第8因子相关抗原多克隆抗体、生物素标记的羊抗鼠、羊抗兔免疫球蛋白（IgG）及链霉菌抗生物素过氧化酶（SP）试剂盒,均购自武汉博士德生物工程有限公司。

　　1.3 实验方法

　　所有石蜡标本均行5 μm连续切片，一张切片行苏木素?伊红（HE）染色核实病理诊断，其余切片按SP试剂盒提供的说明书操作，采用SP免疫组化法，检测组织中ET?1、TSP?1和凝血因子（FⅧRAg）蛋白的表达，二氨基联苯胺（DAB）显色,免疫组化后再经HE复染。以磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作阴性对照，用武汉博士德生物工程有限公司提供的已知阳性切片作阳性对照。

　　1.4 结果判定

　　1.4.1 ET? 1、TSP?1的阳性表达

　　肿瘤细胞胞浆及细胞外基质呈现棕黄色染色,明显高于背景(或背景不着色而细胞着色)者为阳性细胞。测定采用双盲法,2人阅片。先在100倍视野下筛选ET? 1、TSP?1表达最强区,每张切片选3 个视野，然后在200倍视野下,按显色强度(未着色、弱、中、强)和阳性细胞百分数(0；1%～25%；26%～50%；>50%者)分别积分为0,1,2,3分。两项数值之和为0～2分者为ET?1、TSP?1表达阴性，3～6分者为ET?1、TSP?1表达阳性。

　　1.4.2 MVD的测定

　　参考Weidner方法，先在低倍镜(40倍)下扫视整个切片，确定对FⅧRAg明显著色（棕褐色）MVD最高区，即所谓热点区。然后换成高倍镜（200倍）进行记数，结果以3个视野血管的均数表示。

　　1.5 统计学分析

　　采用SPSS12.0软件系统进行统计分析，计量资料以x±s表示，所得数据采用t检验和方差分析，计数资料采用χ2检验。

　　2 结 果

　　2.1 NSCLC中ET?1的表达及与NSCLC临床特征的关系

　　18例正常肺组织中，ET?1表达均为阴性,无阳性表达。ET?1着色主要分布于肿瘤细胞胞浆中，表现为黄色或棕褐色颗粒，阳性肿瘤组织及其邻近基质组织中血管内皮细胞和成纤维细胞也有不同程度的着色。NSCLC中ET?1阳性率为42.22%（19/45），显著高于正常对照组(P＜0.05)；且ET?1的表达与NSCLC的组织学分级、淋巴结转移有密切关系（P＜0.05），而与病理分型无明显关系(P＞0.05)，见表1。